Làm thế nào để thực hiện pha loãng nối tiếp

NộI Dung

• giai đoạn
• Phương pháp 1 Thực hiện pha loãng đơn giản
• Phương pháp 2 Tính hệ số pha loãng và nồng độ cuối cùng

Trong hóa học, pha loãng bao gồm giảm nồng độ của một dung dịch nhất định. Một pha loãng nối tiếp chỉ đơn giản là pha loãng lặp lại của một giải pháp ban đầu để khuếch đại nhanh hệ số pha loãng. Kiểu pha loãng này thường được thực hiện trong các thí nghiệm đòi hỏi các giải pháp pha loãng cao và độ chính xác cao, chẳng hạn như các đường cong liên quan đến thang đo nồng độ hoặc các phép cho phép tính mật độ của vi khuẩn trong môi trường nhất định. Chúng rất thường được thực hiện trong hóa sinh, vi sinh, dược lý hoặc hóa học.

giai đoạn

Phương pháp 1 Thực hiện pha loãng đơn giản

1. 
   

   
   Xác định chất lỏng pha loãng đúng (hoặc chất pha loãng). Việc lựa chọn chất pha loãng là rất quan trọng và phụ thuộc vào giải pháp bạn muốn pha loãng. Chất pha loãng thường là nước cất, nhưng nó không có hệ thống. Do đó, với dung dịch chứa vi khuẩn hoặc tế bào, môi trường nuôi cấy được sử dụng thay thế. Đối với pha loãng nối tiếp, chất pha loãng tương tự được sử dụng trong tất cả các ống.
   • Nếu bạn không chắc chắn nên sử dụng chất pha loãng nào, hãy nhờ trợ giúp từ người có thẩm quyền hoặc tìm trên Internet để biết mọi người phải làm gì để có trải nghiệm tương tự.

2. 
   

   
   
   
   Chuẩn bị một số ống nghiệm chứa 9 ml chất lỏng pha loãng. Những ống nghiệm này sẽ được sử dụng để pha loãng liên tiếp. Nguyên tắc rất đơn giản, bạn sẽ lấy một mẫu của dung dịch bắt đầu và chuyển nó sang ống tiếp theo, sau đó lấy một mẫu của ống này để đặt nó vào ống tiếp theo, v.v.
   • Trước khi bắt đầu pha loãng, nên xác định trước các ống nghiệm để tránh nhầm lẫn sau này.
   • Trong mỗi ống, bạn sẽ có nồng độ thấp hơn mười so với ống trước. Các ống đầu tiên sẽ chứa một dung dịch pha loãng trong phần mười, thứ hai, thứ ba, thứ ba, thứ nghìn, v.v. Xác định trước số lượng pha loãng để tránh tạo ra nhiều ống hơn mức cần thiết và chất thải pha loãng không cần thiết.

3. 
   

   
   Chuẩn bị một ống nghiệm với dung dịch mẹ của bạn. Đặt ít nhất 2 ml. Lượng dung dịch gốc tối thiểu để pha loãng nối tiếp là một mililit. Cho phép 2 ml cho pha loãng thứ hai có thể. Ống dung dịch mẹ này, bạn có thể đánh dấu nó là "SM".
   • Trước khi bắt đầu pha loãng nối tiếp, trộn đều dung dịch bắt đầu.

4. 
   

   
   
   
   Thực hiện pha loãng đầu tiên. Dùng pipet lấy 1 ml dung dịch gốc vào ống nghiệm có nhãn "SM" và chuyển lượng này vào ống nghiệm có nhãn. 1/10 trong đó đã chứa 9 ml chất lỏng pha loãng. Trộn để thu được dung dịch đồng nhất. Trong ống này, hiện có 10 ml dung dịch: 1 ml dung dịch gốc và 9 ml dung dịch pha loãng. Giải pháp mới này ít tập trung hơn mười lần so với giải pháp trước.

5. 
   

   
   Thực hiện pha loãng thứ hai. Trong pha loãng nối tiếp thứ hai, bạn sẽ rút ra 1 ml dung dịch ống có nhãn 1/10 và bạn sẽ đổ nó vào ống 1/100 trong đó đã chứa 9 ml chất lỏng pha loãng. Cái ống 1/10 sẽ được trộn đều trước khi lấy mẫu. Sau khi chuyển xong, trộn đều ống 1/100. Các giải pháp từ các ống được đánh dấu 1/10 đậm đặc hơn 10 lần so với ống được dán nhãn 1/100.

6. 
   

   
   Lặp lại thao tác này nếu cần thiết. Thủ tục này có thể được lặp lại nhiều lần như mong muốn cho đến khi đạt được độ pha loãng mong muốn. Đối với một thử nghiệm liên quan đến các đường cong nồng độ, do đó bạn có thể thu được một loạt các giải pháp với độ pha loãng cho đơn vị, thứ mười (1/10), thứ một trăm (1/100) hoặc một phần nghìn (1/1000).

Phương pháp 2 Tính hệ số pha loãng và nồng độ cuối cùng

1. 
   

   
   Tính toán tỉ lệ sự pha loãng cuối cùng sau khi pha loãng nối tiếp. Tổng tỷ lệ pha loãng thu được bằng cách nhân hệ số pha loãng với số lần pha loãng. Về mặt toán học, công thức như sau: D_t = D₁ x D₂ x D₃ x ... x D_nvới D_t đại diện cho tổng hệ số pha loãng và D_n, tỷ lệ pha loãng.
   • Vì vậy, giả sử rằng bạn thực hiện pha loãng 1/10 chất lỏng 4 lần liên tiếp. Trong công thức, thay thế hệ số pha loãng bằng giá trị của nó: D_t = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
   • Hệ số pha loãng cuối cùng của ống thứ tư trong độ pha loãng nối tiếp của bạn là 1/10 000. Nồng độ dung dịch của ống cuối cùng hiện thấp hơn 10 000 lần so với dung dịch ban đầu.

2. 
   

   
   Xác định nồng độ của dung dịch sau khi pha loãng. Để tìm nồng độ cuối cùng của dung dịch sau khi pha loãng nối tiếp, bạn cần biết nồng độ bắt đầu. Công thức là: C_{sau cùng} = C_{lúc đầu}/ Avới C_{sau cùng} đại diện cho nồng độ cuối của dung dịch pha loãng, C_{lúc đầu}, nồng độ của dung dịch gốc và D, tỷ lệ pha loãng xác định trước.
   • Vì vậy, nếu bạn pha loãng dung dịch tế bào với nồng độ 1.000.000 tế bào mỗi ml và tỷ lệ pha loãng của bạn được đặt thành 1.000, thì nồng độ cuối cùng của mẫu pha loãng của bạn sẽ là bao nhiêu?
   • Sử dụng công thức:
     • C_{sau cùng} = C_{lúc đầu}/ A
     • C_{sau cùng} = 1 000 000/1 000
     • C_{sau cùng} = 1000 tế bào / ml

3. 
   

   
   Hãy chú ý đến các đơn vị được sử dụng. Khi thực hiện các tính toán của bạn, luôn kiểm tra xem bạn có đang sử dụng cùng một đơn vị không. Do đó, nếu bạn bắt đầu từ nồng độ tế bào trên mỗi ml, kết quả cuối cùng của bạn cũng sẽ nằm trong các tế bào trên mỗi ml. Nếu nồng độ bắt đầu của bạn là một phần triệu (ppm), thì nồng độ cuối cùng của bạn sẽ ở mức một phần triệu.